各種緩沖液的制備
　 常用的緩沖液和試劑一般包括包被緩沖液、封閉緩沖液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液、酶結(jié)合物緩沖液、底物緩沖液、終止液等，在研制試劑時，應根據(jù)試劑的種類、試劑的反應原理等，科學、合理選擇適當?shù)木彌_液或試劑。

由于去垢劑可以減小緩沖液的表面張力，從而抑制緩沖液中蛋白質(zhì)與微孔塑料之間的非特異性結(jié)合(Engvall and Perlmann，1972)，因此，一般除包被緩沖液外，其他的緩沖液均可添加一定濃度的去垢劑，如Tween 20、Tween 40、Tween 80、grij 35，以及Triton X-100等，以提高試劑的特異性。目前使用zui廣泛的為Tween 20，其工作濃度一般不超過0．05％。

實際工作中，使用的包被緩沖液一般為碳酸鹽緩沖液(pH9.8，0.1mol／L)，也有研究者稱，使用磷酸鹽緩沖液PBS(pH7，0.1mol／L)，無論是否添加NaCl，均能獲得較好的包被效果。
 
封閉緩沖液可以使用磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液，但需要添加一定濃度(0.1％～1％)的封閉物，如明膠、酪蛋白、BSA、脫脂奶粉或者小牛血清。

孵育緩沖液包括樣品稀釋液和酶結(jié)合物緩沖液，一般使用中性或近中性的磷酸鹽緩沖液、磷酸／檸檬酸緩沖液以及Tris緩沖液。為了提高試劑的特異性，推薦使用PBS(至少0.05mol／L，NaCl濃度不高于0.3mol／L)。

洗滌緩沖液一般應和孵育緩沖液相同，但是不含有NaCl，而是添加去垢劑Tween應根據(jù)試劑所使用的酶，合理選擇底物緩沖液。不同的酶／底物系統(tǒng)需要不同的緩沖液，部分酶還需要特定的輔因子在zui適pH條件才能完成顯色反應。一般使用的酶大多數(shù)為HRP，其底物緩沖液中應添加非離子去垢劑，如Tween 20或Triton 100(Tijs-sen et al_，1985)。由于疊氮鈉是HRP的抑制劑，因此，在選擇防腐劑時，建議用0.1％硫柳汞代替疊氮鈉。

不同的酶／底物系統(tǒng)可能需要不同的終止液，使用HRP時，盡管疊氮鈉和NaCN均可用于終止顯色反應，但考慮安全性方面的原因，常用的終止液為硫酸(濃度4mol／L)。