將ELISA試劑盒免疫活性物質(zhì)（抗原或抗體）結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等；常用的方法有吸附法、化學交聯(lián)法及親和素-生物素間接包被法，特別是后一方法，效率高，ELISA檢測試劑盒而且可用以包被不易吸附在固相上的各種免疫活性物質(zhì)。具體做法是先將鏈霉親和素包被在固相載體上，然后使與生物素化的抗原或抗體與之結(jié)合。由于親和素與生物素之間的高親和力，抗原或抗體即間接結(jié)合在親和素包被的固相上.
4．酶和底物 在ELISA試劑盒中zui常用的酶為HRP和ALP。
（1）HRP：是一種糖蛋白，含糖量約18％，分子量為44kD，在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一種復合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合形成一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為五色糖蛋白，在275nm波長處有zui高吸收峰；輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，是酶的活性基團，在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用純度值（reinhartzahl，RZ）表示，RZ＝A403nm／A275nm，ELISA試劑盒即403nm的吸光度與280nm的吸光度之比，高純度HRP的RZ值應≥3．0。HRP質(zhì)量的另一重要指標是酶活力，以單位（unit，U）表示。

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